做细胞培养实验时，请注意以下几点！

细胞培养注意事项

1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。

2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。

3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。

4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。

5. 定期检测下列项目：5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。

6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水

现在做细胞培养实验的实验室越来越多，如果打算开展或者已经开展的单位或者实验室更要做到以下几点。

 

1、选择正确的培养基

在养细胞之前，就要了解，你所养细胞的来源以及种类和名称，查阅一定量的文献，确定所需培养液种类以及是否需要添加特殊成分，常用的细胞培养液有DMEM、RPMI1640、F12等等，一些常见的细胞基本可以使用这几种培养基中的一种来培养，有的需要加入一定其他成分，这需要根据不同的细胞类型，查ATCC细胞库或者查文献，才能找到所需最佳培养液。选择正确的培养液是养好细胞的第一步。

2、了解细胞的生长习性

不同的细胞生长习性不同。如成纤维细胞是贴壁生长，有一定的密度依赖性，密度小可能会出现不增殖，状态差的情况，接种密度大时则需要隔天传代，频繁传代则影响细胞状态；再如RPMI-8226人多发性骨髓瘤细胞，是悬浮生长的，传代需离心弃去上清即可。总之，了解细胞生长习性，再加上正确的计数，才能掌握好传代的密度。

3、选择优质的血清

血清中含有细胞生长所必须的生长因子，作为哺乳动物细胞培养的附加物，血清的添加是十分重要的，因此，选择优质的血清，是细胞养殖成功与否的关键！

4、及时传代和更换培养液

在细胞增殖到一定的密度后，要及时传代，根据细胞的生长速度和密度，及时更换培养液。更换过勤，浪费培养液，更换不够及时，则细胞状态转差，一般需隔天更换培养液，具体可根据所养细胞种类予以调整。

5、绝对的无菌意识

前面林林总总全部都注意好了，如果无菌意识差，细胞中混入了微生物，则千里之堤溃于蚁穴，细菌的生长速度和破坏力，将迅速占领培养皿，破坏细胞结构，有些初学者会在培养液中加入1%的双抗，但是，无菌意识不强，双抗亦无法拯救你的细胞！

6、倾心的呵护，频繁的观察

做到以上几点，就可以开始养你的细胞了，但是再次重申细胞娇弱，在养细胞的过程中，难免会出现一些意想不到的问题，要想成功养好细胞，时时惦记它
，频繁地观察，初期一天观察2次都不足为过，出现任何预料外的情况，及时处理，才能保障收获一盘“漂亮”的细胞。