实验室对支原体污染预防的几种方法

支原体是细胞外生存的最小微生物，是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.2～0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状，分枝状等多种态。

从上面那段话我们可以知道：

1. 支原体存在于我们周围，他可能就如尘埃一样存在于我们的环境中。

2. 可透过一般的滤膜，所以不要寄希望于过滤可以清除支原体污染的液体。

支原体是一个可以胞外生长的细菌，只要接触到你的细胞培养过程中的任何东西都会发生支原体污染。所以细胞培养的每一步均要小心翼翼。

那支原体应该怎么预防呢？

1. 支原体不耐干燥，所以要保证你的细胞间通风是正常工作的，经常清洗filter，保持房间干燥整洁。另外所使用的东西在有液体撒出时，及时清理，保证你的瓶子，离心管干燥。

2. 支原体对热抵抗力差，所以煮沸或高温均可以杀灭支原体。提示所有的细胞用具都要高压灭菌，所有废液都应该处理。

3. 对紫外线敏感，所以细胞间要定期开紫外线。

4. 支原体易被脂溶剂、清洁剂、常用消毒剂，如酒精、酚、甲醛、来苏尔等灭活。所以应该定期用这些物品清理孵箱，细胞台。在清理孵箱时不要忘记清理filter。

5. 实验室应该定期杀杀支原体。

因此，在细胞培养过程中，定期监测是否存在支原体污染，及时预防支原体污染是每个科研人员的工作之一。下面笔者给您推荐几个支原体防控的产品，仅供参考。这些都是德国Minerva Biolabs公司出品，在国际期刊上也具有很高的引用率。

一、环境中的支原体污染的预防和清除

Mycoplasma OffTM是一款支原体喷雾剂，用于清除工作区域中的支原体。它起效快（10秒钟即起效），安全无毒，对细胞不会产生不良影响，喷洒后，可再用干净纸张擦拭即可。对于工作台以及各种细胞操作的器具表面，均可使用。如果是需要避免沾染液体的电子设备，可使用Mycoplasma OffTM湿巾擦拭。

细胞孵箱、水浴锅等有温水的地方，也容易滋生支原体、细菌等。在循环水中倒入Water ShieldTM（1：200稀释）即可有效地预防滋生，效果可持续1个月左右。

Mycoplasma OffTM对许多细菌、病毒也有预防和杀灭作用。

二、细胞培养中支原体污染的祛除

通常来说，被污染的细胞应该丢弃，以避免成为污染源。但对于珍贵的细胞，可使用Minerva Biolabs公司的Mynox®或Mynox Gold®。以往别的品牌的支原体清除剂，其实只是抑制剂，它们抑制支原体的DNA合成和蛋白合成，但无法杀除。Mynox®是市面上一款具有杀灭作用的清除剂。它提取自枯草杆菌，可与支原体膜特异性结合，破坏膜通透性，导致支原体膨胀破裂而死。使用Mynox®一般在2-3个小时即可完成清除任务。

Mynox Gold®是Mynox®的升级版，它通过四个疗程产生作用。每个疗程即细胞传一代。它除了包括Mynox®，也包含复合抗生素成分。以往别的品牌的支原体清除剂只是针对支原体的抗生素成分，但也容易产生耐药。Mynox Gold®将Mynox®和抗生素结合，即结合了二者的优点，又去除了二者的不足，因为有的细胞对Mynox®的治疗不太适应，而Mynox Gold®要比Mynox®更加温和，对细胞的毒性效应极小，因而更适用于脆弱的不太好养的细胞。

三、细胞培养中支原体污染的预防

Zell ShieldTM直译过来是细胞盾pai，它不仅能杀菌，还可抑制支原体的蛋白和DNA合成，因而能避免支原体的污染。使用时按1：100的比例加到培养基中，即可使用。它是复合抗生素成分，支原体耐药的出现几率很低。

四、细胞培养中支原体污染的监测

可使用MB公司出品的Venor® Gem系列，常用的是一步法试剂盒（Venor® Gem OneStep），它采用灵敏的PCR方法，能识别常见的至少二十七种支原体。所有试剂均在一管内，为稳定的冻干粉形式，用缓冲液溶解后可直接使用。细胞上清取2l即可完成支原体的筛查。

总之，支原体虽然发生率高，但可放可控。以上仅仅列举的是实验室的情况，对于生物制药企业，如果是病毒液中发现支原体的污染，也可以采用Mynox®进行清除。总之，支原体的检测和预防已成为一项常规操作，这对保障细胞学实验的顺利进行，是非常重要的。