如何识别和预防常见的细胞污染？

细菌污染：细菌是一种原核细胞微生物，其大小以微米(μm)计。常见的污染细菌有革兰氏阴性菌和大肠杆菌、假单胞菌等，革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。

一旦发生细菌污染较易发现，多数情况下培养液短期内颜色变黄，表明有大量酸性物质产生，出现明显混浊现象；有时静置的培养液液体初看不混浊，但稍加振荡，就有很多混浊物漂起。倒置显微镜下观察，可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮。必要时可取少量培养液涂片染色检查以证实细菌种类；有的培养液改变不明显而又疑有污染，可取出少量培养液用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可取10ml细胞悬液以100rpm离心5min，沉淀中加入无抗生素的培养液2ml，置于37℃培养，24h可得结果。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。

看到这种，别犹豫了你的细胞被污染了，那么怎么办呢，基本原则立马扔掉，别扩大污染，如果你的细胞真的十分宝贵，先用带有双抗的PBS反复冲洗几遍，然后再培养液中加入硫酸庆大霉素、新霉素（50ug/ml）等，培养3天后换成带有双抗的培养液培养。

真菌污染：是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在梅雨季节进行细胞培养更易污染。污染培养细胞的多为烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。一般肉眼可见，较易被发现，短期内培养液多不混浊，倒置显微镜下可见于细胞之间纵横交错穿行的丝状、管状、及树枝状菌丝，并悬浮飘荡在培养液中。很多菌丝在高倍镜可见到有链状排列的菌珠；念珠菌或酵母菌形态呈卵形，散在细胞周边和细胞之间生长。镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。

真菌污染真的不建议处理，因为孢子容易飘散，可能这瓶没9过来，又扩大了污染，建议预防为主，在培养箱的水中加入硫酸铜，就是蓝色的那种东西。哎，如果你非救不可，可以采用两性霉素B（0.25-2.5），三天后换液加入含PS的培养液。

支原体污染：支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物。约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性。可为圆形、丝状或梨形。

支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构。其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央无颗粒群或中央束。

支原体污染细胞后，培养液可不发生混浊。多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解，因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢，甚至从培养器皿脱落。

是时候展示真正的技术了！推荐大家使用MB公司的专li符合抗生素Zell Shield®

按照以下使用说明对细胞进行处理：

1、在每次使用Zell Shield®之前，细胞传代时，先使用厂家推荐的“悬浮冲洗法"处理好细胞，再使用加了Zell Shield®的培养基养细胞，能达到最佳的祛除支原体的效果。

2、Zell Shield®常规为-18℃保存，使用前先融化分装，后续依旧-18℃避光保存，使用时按需融化配置。避免反复冻融。

3、Zell Shield®按1:100浓度可直接加入培养基（例如：500ml培养基中添加5ml Zell Shield®，50mL/瓶的Zell Shield®可供5L培养基使用）。

处理方法：Zell Shield®处理细胞

并清洁空间和器械

处理难度：

Vol.3

情景三：细胞本身就非常珍贵不能丢

有时候会遇到一些特别珍贵的细胞或是病毒样品，即便是污染了也希望可以拯救一下，减少损失。

针对细胞不同的特性，处理方式也有些许区别：

一、短时间内就要收样的病毒或细胞样品：

可以用德国MB公司的Mynox® 对样本进行快速清除。

它来自枯草芽孢杆菌提取物，可以特异性地与支原体膜结合，改变其通透性，能够在2-3小时内快速清除支原体，使用方法如下：

二、需要长期培养、保存的样本：

可以用Mynox® Gold对样本进行*清除。

它是上面Mynox®的升级版，配合自带的「巩固防护液」，可以在后续的培养中（约1个月）持续发挥杀灭支原体的作用，并预防支原体生长，适合需要反复传代、长期保存的珍贵细胞，方法如下：

以上两种方法搭配支原体环境祛除产品一起使用，消灭支原体更*，防止复发！

处理方法：Mynox®或Mynox® Gold

并清洁空间和器械

处理难度：

Vol.4

情景四：环境中的支原体祛除

讲真，实验用的支原体祛除试剂属实不便宜，为了不给支原体卷土重来的机会，最好同时把实验环境中的支原体也一起消灭（试验台、超净台、培养箱、液氮罐、移液器），常见的有以下这些方法：

顺便用Water Shield™把培养箱和水浴锅的水槽也一并清洁了，保持水源的洁净。

处理方法：使用专门的环境用支原体祛除试剂

处理难度：

虽说现在市面上各种各样的支原体清除产品层出不穷，但避免污染的最好方式还是注意实验规范以及定期清洁，最后希望大家的实验都顺顺利利，原理污染。

如果怀疑细胞被支原体污染可使用支原体检测试剂盒进行检测，如果确定是支原体污染可以选择支原体去除试剂进行处理。