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实验室被支原体污染后如何处理

更新时间:2022-01-29  |  点击率:817

细胞培养过程中,支原体感染发生率达到63%,因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。当细胞(特别是传代细胞)被支原体污染后,细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变,而细胞的生长率一般并未发生显著的影响,因而细胞被支原体污染一般难以察觉。

后果

细胞株若受到细菌、真菌、支原体、或是特定病毒等之污染时,会严重的影响实验的结果。而细菌、真菌等之微生物污染时,较易自培养基等的外观变化察觉。但是若受到支原体之污染时,细胞之外观较无明显变化,但是其污染会造成细胞之生长速率缓慢、细胞产生病变之型态改变等等变化。

高污染率原因

1、支原体size 0.1~0.8 um,无细胞壁,可透过一般过滤膜(0.22-0.45 um)

2、支原体污染时,没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化

3、过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式

4、细胞流通间缺乏品管,造成实验室间的相互污染

5、研究或操作人员忽略污染问题

对于低流行地区,PCR检测人员经过严格培训上岗后,核酸污染的风险相对较小,但在疫区超负荷工作时,就可能会遇到核酸污染的问题,可通过以下措施降低污染机会:
  1.正确佩戴手套:手套未紧密贴合拇指、食指和中指,在进行开盖操作时容易发生交叉污染。
  2.正确使用生物安全柜:简单、整洁、避免通风口堵塞;操作前后紫外线照射,消毒剂随手可及;废液缸里有1/3体积的含氯消毒液,并且及时清理废液缸,保证废物不超过废液缸体积的2/3。
  3.核酸提取仪去污染:每天多批次检测时,在每一批次检测完以后必须用75%的乙醇和核酸去除剂对仪器进行去污染。
  4.重视通风:不定期对房间进行通风,每次至少持续30min。
  5.PCR扩增区去污染:PCR反应管必须盖紧,避免扩增后的核酸对环境的污染。
  6.实验室随手可及的消毒剂。

有没有什么方法能够简单高效地祛除DNA污染呢?

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当然有:Minerva Biolabs PCR Clean™

通过中和以及降解的原理,可快速有效地祛除任何物体表面的DNA、RNA以及DNA酶、RNA酶的污染,使它们快速的降解,从而确保PCR实验结果的准确。

使用方法也十分简单:

将PCR Clean™喷在操作台表面,反应1分钟后,即可用干净纸巾擦干试剂。

注:如果没有擦拭干净,液体挥发后表面可能有白色残留,影响美观。此时可用喷壶喷洒蒸馏水到白色残留处,然后擦拭即可。

针对移液器需要去除DNA污染,可按照说明书拆开移液器,将杆轴浸泡在PCR Clean™喷雾剂中,1分钟后取出后用水冲洗,晾干,重新组合。

PCR Clean™的优点:

1、快速:1分钟起效。

2、方便:喷雾剂可直接使用。

3、保护实验人员,避免接触DNA污染。

4、稳定性强:PCR Clean™耐热,可在室温保存至少一年。低温可能会形成沉淀,但在37℃迅速溶解。即使在65°C条件下存放两周,也不会影响喷雾剂的祛除效果。

5、成分安全:PCR Clean™含有少量的磷酸和乙氧基醇,成分非碱性,无致癌性。


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