细胞培养之支原体检测方法~支原体常规PCR法

细胞培养过程中，由于实验环境、操作者鼻腔口腔、实验器材等很多地方都有支原体的存在。因此，细胞发生支原体污染的频率很高。据美国数据统计，细胞发生支原体污染的几率在70%以上。

同时，由于支原体直径很小，仅在180nm~350nm之间，只有通过电镜才能看到。因此，支原体污染不易被实验者肉眼发觉。而支原体污染是个循序的过程，普通抗生素对其无效。因此，被支原体污染的细胞会持续受到影响，导致实验数据不准确。

支原体污染不仅是细胞培养中需要克服的现象，而且是制药、生物制品生产中需要加以避免的。支原体污染的影响是什么？

支原体常规PCR法其原理和荧光定量PCR是一样的，根据支原体核糖体的特异保守序列设计引物，对待检样本DNA进行扩增，通过对扩增产物的大小分析作出判断。

它的优点是准确度很高，特别是德国MB的试剂盒，不仅qPCR的灵敏度可以达到10CFU/ml以上，普通PCR的灵敏度也可以达到各国药典的这个要求。

特异性强，*涵盖所有可能感染细胞的支原体物种（涵盖欧洲药典规定的9种支原体），根据序列一致性，至少可以检测到107种支原体物种。与细菌和真核DNA无交叉反应。

操作比qPCR多了个跑电泳的步骤。

时间短，2-3小时可以出结果。

唯yi的限制，因为检测的是支原体的DNA，所以无法区分活的支原体。但生物制品在生产过程中，本身不应该产生支原体污染，污染过也不行，所以这个限制反而变成了优点。