细胞培养相关知识

细胞培养是指细胞在体外的培养技术，即在无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生存的基本条件，让它在培养皿中继续生存、生长和繁殖的方法。通过细胞培养我们可以获得大量的、性状相同的细胞，以便于研究细胞的形态结构、化学组成及功能和机制。

细胞真的很脆弱，就像小婴儿一样，需要你无微不至的关怀。

培养细胞之前，你需要做好这些准备：

1、耗材的处理、

玻璃器皿的清洗，对于玻璃器皿(细胞瓶、装营养液的瓶子、小青霉素瓶等)要用洗衣粉刷干净(注意死角)，然后冲干净。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水冲洗数遍，除去残留酸液。瓶子之类，冲洗过程要使劲摇晃。

2、试剂的配置

试剂配置，细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意 pH 值的调节。

3、无菌检验

无菌检验，主要采用过滤除菌：如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各类培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺等。有些可以采用高压灭菌：如 PBS、D-Hank's等。

不同细胞对培养基的要求是不同的，要根据自己的细胞要求使用。

细胞培养中最重要的步骤——无菌操作

实验进行前，超净台以紫外灯照射 30 分钟灭菌，以 70 % ethanol 擦拭无菌操作台面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。

每次操作只处理一株细胞株，避免细胞间交叉污染。

实验完毕后，将实验物品带出工作台，再次以 70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。实验用品以 70% 乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般不要再边缘区域操作。

细胞培养后期——定期观察

你最好做到每天都去探望探望它们，看看他们的成长情况

1、检查培养液颜色与透明度的变化，颜色变黄，说明PH值下降;变红或紫红色，说明PH值上升，细胞生长停滞、死亡，一般生长稳定的细胞2-3天换液一次，生长缓慢的细胞可3-4天换液一次。

2、观察细胞生长状态，细胞长满瓶底的80%，应及时传代。

3、观察细胞形态变化，细胞透明度大、折光性强、轮廓清晰为佳。

4、注意微生物污染，常常出现培养液混浊，液体内漂菌丝或细胞菌，不仅仅指微生物，包括所有混入培养环境中的细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物及细胞。

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