细胞生存环境、条件和代谢

培养细胞生存途径和物质代谢与体内细胞基本相同，随生存环境改变出现一定差异。

（一）环境

培养环境无毒和无菌是保证培养细胞生存的首要条件。保证细胞生存环境无任何污染、代谢物及时清除，是维持细胞生存的基本条件。

(二)温度：

人哺乳动物：36.5℃±0.5℃;

鸟类：38.5℃;

培养细胞对低温耐受力比高温强；温度上升不超过39℃时,细胞代谢强度与温度成正比。

39～40℃1小时,受损伤的细胞可能恢复；

41～42℃1小时,严重损伤,个别细胞恢复；

43℃以上1小时，细胞全部死亡

温度不低于0℃时,细胞代谢有影响,无伤害作用;

置于 25～35℃，细胞能生存，但生长速度减慢；

放在 4℃ 数小时,再放回 37℃ 细胞仍继续生长。

细胞代谢随温度降低而缓慢，温度降至冰点以下时,细胞因胞质结冰受损而死亡。

(三)气体环境和氢离子浓度

气体：氧气和二氧化碳

氧气:参与三羧酸循环产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种所需成分。

开放式培养(碟皿或培养瓶松盖培养)细胞置于95％空气加5％二氧化碳混合气体环境中。

CO2：细胞代谢产物, 是细胞所需成分。

主要作用:维持培养基的pH值。大多数细胞的适宜pH7.2~7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。

有些细胞存在差异。如羊水细胞培养检测染色体时pH为7.6。

细胞耐酸比耐碱性大一些,在偏酸性环境中更有利于细胞生长。

为了维持培养液恒定的pH，常用磷酸缓冲剂方法。

磷酸缓冲剂中NaHco3,可供给CO2但容易逸出，适用：封闭式培养的细胞。（无CO2培养箱）

Hanks平衡液：含有低浓度的NaHCO3,当打开含有Hank液培养瓶时，CO2迅速逸出而导致酚红指示剂变红，表明培养液pH变碱，细胞在碱性的环境中时间过长可使细胞碱中毒。

羟yi基pai嗪乙硫磺酸(N`-2-Hydroxyethyl Piperazine-N`-Ethanesulfonic Acid缩写HEPES)

HEPES：对细胞无毒性也不起缓冲作用，主要作用是：防止pH迅速变动，在开瓶通气培养或活细胞观察时能维持恒定的pH。

（四）细胞生存所需基本物质

与体内基本相同，除碳水化合物、氨基酸、脂类三大类营养物质外，一定量的无机盐、维生素和微量元素等，但需要的量以及代谢方式与体内细胞不尽相同。

糖：六碳糖是主要的能源通过糖酵解 形成 乳酸和通过柠檬酸形成 CO2。

胚胎细胞和一些转化细胞的培养基中常见到乳酸堆积现象。

糖是合成某些氨基酸的原料；

经过乙酰fu酶A（CoA）合成脂肪；

经过糖解磷酸通路能合成核酸。

各种糖的吸收取决于它们进入细胞的能力,其中葡萄糖*,半乳糖zui低。

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