二倍体细胞培养方法原理及实验步骤

实验方法原理

二倍体细胞来源体内二倍体细胞，也即正常细胞的初代培养。初代培养细胞成功后能始终保持二倍体细胞性状，便成为二倍体细胞培养。
二倍体细胞虽不难培养，但欲求长期呈旺盛地增殖生长、并保持二倍体细胞性状，亦非易事。为此必须采取一些有效的措施，一是低温冻存，二是妥善的培养方法。
用反复传代的方法以求获得大量细胞和维持细胞长期生存的办法是不妥的。因在反复传代中，难免由于培养条件的变化和其它不利影响，使细胞生物学性状发生变化。随时间延长不仅能导致细胞停止生长，并可失掉二倍体性状或发生转化。

实验步骤

二倍体细胞培养方法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为

1. 吸除旧培养液注入另瓶中；

2. 用BSS冲洗1 次；

3. 用0.25%胰蛋白酶消化，加入消化液量以仅覆盖住细胞层即可；作用1~5 分钟；

4. 待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大，便终止消化；为防止细胞丢失可不必再用BSS冲洗，直接向瓶中加入培养液（新旧培养液按2：1）新旧混合；

5. 轻轻反复吹打制成单个细胞悬液（消化不足或吹打不充分，易形成细胞团，不利于生长，应注意避免）；

6. 按一分为二比例接种培养。

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