细胞培养环境的无菌控制~操作间及超净工作台

支原体检测与祛除试剂

通常情况下，细胞培养需要在严格的无菌条件下进行，既包括无菌环境，也包括无菌操作。今天就“细胞培养过程中，环境的无菌控制"这一话题，给大家分享一些小技巧，希望可以给各位的实验提供帮助。

细胞培养所用的无菌室的结构：

一般由更衣间、缓冲间、操作间三部分组成。

无菌室需进行定期消毒和防污染处理：

1、采用每日（使用前）紫外照射（1－2小时）。

2、每周甲醛或过氧乙酸熏蒸（2小时），如果为了节省时间，也可以每周用新洁尔灭擦拭地面墙壁、桌面方式进行消毒。另外，在实际操作过程中，还应考虑无菌室建筑材料的差异来选择合适的消毒方法。

3、防止无菌室的污染：通风系统出风口滤膜定期更换；进出无菌室时，避免外界空气直接对流进无菌室的操作间。

4、定期使用支原体祛除试剂对桌面进行喷洒或擦拭。

MB Mycoplasma-off™

祛除支原体喷雾剂（实验环境用）

细胞培养所用的超净工作台

超净工作台的工作原理：

鼓风机将外界空气抽进超净台，通过高效过滤器净化，祛除空气中的微生物，净化的空气吹过超净台的内部空间，而将尘埃、细菌、病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。

由于气流在超净工作台中多的流动方向不同，因此可以将超净工作台分为侧流式、直流式和外流式三种类型。

超净台的使用与保养：

1、超净台的平均风速一般保持在0.32-0.48米/秒，过大、过小均不利于保持台面洁净。

2、使用前建议开启超净台内紫外灯照射30分钟，然后打开通风系统，让超净台预工作3-5分钟，以除去紫外线照射产生的臭氧。

3、使用完毕后，要用75%酒精将台面和台内四周擦拭干净，以保证超净台无菌。还要定期用支原体祛除试剂清洁超净台。

支原体常规PCR法其原理和荧光定量PCR是一样的，根据支原体核糖体的特异保守序列设计引物，对待检样本DNA进行扩增，通过对扩增产物的大小分析作出判断。

它的优点是准确度很高，特别是德国MB的试剂盒，不仅qPCR的灵敏度可以达到10CFU/ml以上，普通PCR的灵敏度也可以达到各国药典的这个要求。

特异性强，*涵盖所有可能感染细胞的支原体物种（涵盖欧洲药典规定的9种支原体），根据序列一致性，至少可以检测到107种支原体物种。与细菌和真核DNA无交叉反应。

操作比qPCR多了个跑电泳的步骤。

时间短，2-3小时可以出结果。

唯yi的限制，因为检测的是支原体的DNA，所以无法区分活的支原体。但生物制品在生产过程中，本身不应该产生支原体污染，污染过也不行，所以这个限制反而变成了优点。