介绍排除杂细胞的方法

介绍排除杂细胞的方法：

1、使用含肝素的培养液：

在培养液中加入90 U／ml的肝素，可使内皮细胞纯度提高；

2、在相差显微镜下刮去明显的杂细胞群。

表皮细胞:

来源：小儿包皮、全皮细胞不易与成纤维细胞混合生长区分。

以胶原为底物；

温度低易生长；

在培养基中加入氢化ke的松(10g/ml）；或 10-6 异丙肾上腺素；或10-10霍乱毒素；或10ng/ml表皮生长因子；

上述任何一种物质细胞易生长。

巨噬细胞：

特点：保持原有形态和吞噬物功能，易于分离不易建立传代细胞系，生存2～3周

无刺激：小鼠/只 2 ～ 3106个/只

刺激物：牛血清、矿物油、硫羟乙酸盐，刺激1ml/只 20 ～30 106 个/只,但刺激物难消化掉，残留在细胞内，干扰细胞生长。

用40ugPHA注射腹腔中 6 ～ 18 106 个/只，效果好。

乳腺细胞：

来源：腺上皮细胞

消化：胶原酶

注意：接种底物加胶原

使用1640培养基加10％小牛血清,补加氢化ke的松、胰岛素；乳腺细胞易生长。

心肌细胞：

来源：心室肌,1～3ｄ龄, 剪成0 .5～1ｍｍ3大小组织块,放入锥形瓶中。消化：加入 (0. 8ｇ/Ｌ)胶原酶Ⅰ,在37℃水浴,磁力搅拌器转速为100ｒ/ｍｉｎ,消化10分钟。

消化:胶原酶Ⅰ, 0.25%胰蛋白酶

易于生长：50ｍｇ/Ｌ多聚赖氨酸涂在培养瓶内.

注意：分次消化可减轻胶原酶或胰蛋白酶对单细胞的破坏作用。消化温度在35～37℃左右,过高温度会增加胶原酶或胰蛋白酶的毒性,温度过低会降低胶原酶或胰蛋白酶的活性。

心肌细胞质量评价：

纯度鉴定:镜下观察、计数纯化后的细胞；

观察：心肌细胞成圆型 成纤维细胞成梭形,

计算：心肌细胞纯度=心肌细胞数/(心肌细胞数+成纤维细胞数)×100%。

神经细胞：

消化：0.1%胰蛋白酶

10－5 M 阿糖胞苷去除胶质细胞。

成纤维细胞

建立细胞株系的常用

来源：以人胚皮肤、幼儿包皮为好

消化：胰蛋白酶

注意：

1.从细胞生长到第一次传代需1～2个月左右时间

2.以后传代7～10天传1次，3～4天/次（换液〕

3.无菌操作减少霉菌的污染;二性霉素抑制霉菌生长，但也能抑制细胞生长

4.如组织块，绝对避免翻动和振动，否则组织块不易附着或附着后脱落.

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