常规细胞实验大汇总~细胞增殖实验

在很多课题中，细胞实验都是*的。除了之前我们介绍的细胞复苏、传代和冻存这“基础三件套"之外，还有许多常见的操作，需要我们了解甚至是熟练掌握。

今天我们就来盘点一下，那些助力高分文章发表的细胞实验技术（第一期）。

细胞增殖实验

MTT法：又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。

检测原理：

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

用途：广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

特点：灵敏度高、经济。

CCK-8法：又称细胞增殖和细胞毒性实验。

检测原理：

该试剂中含有WST-8，在电子载体1-Methoxy PMS的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（Formazan dye）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

用途：广泛用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。

特点：对细胞毒性小，可以多次测定选取最佳测定时间；检测迅速；灵敏度高。

BrdU法：直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞增殖能力。

检测原理：

用BrdU预处理的细胞中，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中，而且这种置换可以稳定存在，并带到子代细胞中。细胞经过固定和变性处理后，可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量(如采用鼠抗BrdU单克隆抗体特异识别BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠IgG二抗标记，最后用比色法或荧光的方法进行定量测定)，从而判断细胞的增殖能力。

用途：可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。

特点：简单、快速、安全，检测的敏感性好；适合于大块组织的快速检查，尤适于定量研究；BrdU既可用于活体标记，亦可用于细胞或组织细胞增殖、分化的标记。副作用低；此方法的缺点是标记时间较短。

EDU法：检测细胞增殖的方法。

检测原理：

EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。

用途：在细胞水平上EdU对增殖细胞的标记，对植物增殖细胞进行标记并检测、细胞示踪实验等。

特点：EdU法检测细胞增殖，无需抗体，无变性步骤，保持细胞形态和DNA完整性。

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