培养基灭菌方法

培养基的灭菌方法

1、高压蒸汽灭菌：

高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培养基在爱制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内完成灭菌工作。灭菌时一般是在0.105MPa压力下，温度121℃时，灭菌15~30min即可。消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包扎封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。 灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d，若无污染现象，则证明灭菌是*的，可以使用。暂时不用的培养基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其他培养基最多也不要超过1个月。

2、过滤灭菌：

一些植物生长调节剂及有机物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。细菌过滤器与滤膜（孔径0.45微米）使用之前要先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之前（50-60℃）加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。

处理细胞培养工作区域的支原体

这里的工作区域包括实验台、超净台、培养箱（水槽除外）、液氮罐、移液器、门把手等细胞培养的环境。

使用德国MB公司生产的支原体祛除喷雾或湿巾（品名：Mycoplasma-off™），可在5-10分钟清除支原体，高效快速，操作方便。

产品特点及原理：

1）快速有效

喷雾剂和湿巾中含有支原体专用杀除剂Mynox®，可在几分钟内迅速杀除支原体。

与传统的化学试剂熏蒸方法相比，更加安全；与传统酒精处理、紫外线照射方法相比更有效！

2）广谱抗菌

不仅能去除支原体，而且能有效祛除葡萄球菌、肠球菌、大肠杆菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、牛腹泻病毒、腺病毒、多瘤病毒、诺如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

3）无腐蚀性和致癌性

乙醇作为溶剂，无腐蚀性和致癌性成分。

4）操作简便

即用型消毒液，可以快速简单地保持工作区的清洁干净。

使用方法及步骤：

喷雾剂:

注：对于细胞培养箱，内部喷洒支原体祛除喷雾或用湿巾擦拭后，应打开箱门通风至少1小时。如培养箱带热灭活功能，可开启该功能以替代风干。

湿巾:

对于移液器，门把手，电子设备等，可使用支原体祛除湿巾。擦拭后，应让其被消毒物体的表面保持湿润，再让其自然风干。

培养箱水槽和水浴锅中预防支原体污染的方法

细胞培养环境中，培养箱水槽、水浴锅经常会有支原体以及各种细菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及时，水槽中的水源即会成为细胞污染的重要来源。

保持水槽的洁净，对细胞培养的顺利进行非常重要。

推荐全球众多实验室日常都在使用德国MB公司生产的Water Shield支原体污染防护剂（水槽用）。Water Shield可持续作用四周，使水源避免受到支原体、细菌、酵母、霉菌和孢子的污染。

产品特点：

1）长效。Water Shield含表面活性剂、季铵盐和络合剂，不易挥发，可持续作用4周。

2）安全。不含醛类或叠氮化物，对细胞无毒害。

3）广谱。预防支原体、细菌、酵母菌、霉菌和孢子污染。

4）方便。Water Shield按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

5）不产生水垢。

操作步骤：

1）Water Shield和蒸馏水可直接加入培养箱水槽或水浴锅中。

2）Water Shield按1:200比例使用，例如：1000ml蒸馏水+5ml Water Shield，或10L蒸馏水+50ml Water Shield。

3）4周左右清洗水槽，换水，重新加入Water Shield。

注意事项：

避免吸入。眼睛接触或长时间皮肤接触可能会产生刺激性。因而，使用试剂时应戴上护目镜和一次性手套。一旦皮肤接触，应用大量水冲洗。

Water Shield对玻璃、陶瓷、塑料、橡胶、钢制品、贵金属和其他金属安全性良好