叶酸测定培养基菌株活化及菌悬液制备方法及注意事项

　　叶酸测定培养基叶酸是鼠李糖乳杆菌生长所需的营养素，在一定控制条件下，将鼠李糖乳杆菌液接种至含有式样液的培养液中，培养一段时间后测定透光率（或吸光度值），根据叶酸含量与透光率（或吸光度值）的标准曲线计算出试样中叶酸的含量。

　　叶酸测定培养基的菌株活化及菌悬液制备

　　1.将鼠李糖乳杆菌转接至琼脂培养基中，在37℃±1℃培养箱中培养20h-24h，连续传中2代-3代。

　　2.实验前一天，取2mL叶酸标准工作液与4mL叶酸测定用培养液混匀，分装至2支5mL离心管中，于121℃高压灭菌15min即为种子培养液。待冷却后用接种环将活化的菌株转种至2支种子培养液中，于37℃±1℃培养箱培养20h-24h。将种子培养液混匀，无菌操作下吸取0.5mL转种至另2支已消毒但不含叶酸的培养液中，37℃±1℃培养6h，振荡混匀，制成接种液，立即使用。

　　注意事项：制备菌株过程需注意严格进行无菌操作，防止污染杂菌。

　　叶酸测定培养基的样品处理

　　1.直接提取法：称取固体试样或液体试样0.5g-2g（精确到0.001g），转入100mL锥形瓶中，加入80mL氢氧化钠乙醇溶液，超声振荡2h-4h至试样*溶解或分散，用水定容至刻度。

　　2.酶解提取法：称取适量试样（精确到0.001g），转至100mL锥形瓶中，加入30mL磷酸缓冲液，振摇5min后，于121℃高压水解15min；待试样冷却至室温，加入1mL鸡胰腺溶液（含有蛋白质、淀粉的试样需另加入1mL蛋白酶-淀粉酶液）混合，加入3滴-5滴甲苯后，置于37℃±1℃培养箱内酶解16h-20h，取出转入100mL容量瓶，加水定容至刻度，过滤。