细胞培养之——污染筛查

你最好做到每天都去探望探望它们，看看他们的成长情况

1、检查培养液颜色与透明度的变化，颜色变黄，说明PH值下降;变红或紫红色，说明PH值上升，细胞生长停滞、死亡，一般生长稳定的细胞2-3天换液一次，生长缓慢的细胞可3-4天换液一次。

2、观察细胞生长状态，细胞长满瓶底的80%，应及时传代。

3、观察细胞形态变化，细胞透明度大、折光性强、轮廓清晰为佳。

4、注意微生物污染，常常出现培养液混浊，液体内漂菌丝或细胞菌，不仅仅指微生物，包括所有混入培养环境中的细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物及细胞。

你培养的细胞被污染了，无非是下面几个污染途径：

1、空气是微生物传播的最主要途径，操作时尽量避免说话、咳嗽、打喷嚏;

2、使用的培养器械及器皿清洗消毒不*;

3、培养两种以上细胞时，操作不规范，可能导致细胞交叉污染;

4、血清有问题，可能血清在生产时就已经被支原体或病毒污染;

5、原代培养的污染多数来源于组织样本。

这里的工作区域包括实验台、超净台、培养箱（水槽除外）、液氮罐、移液器、门把手等细胞培养的环境。

使用德国MB公司生产的支原体祛除喷雾或湿巾（品名：Mycoplasma-off™），可在5-10分钟清除支原体，高效快速，操作方便。

产品特点及原理：

1）快速有效

喷雾剂和湿巾中含有支原体专用杀除剂Mynox®，可在几分钟内迅速杀除支原体。

与传统的化学试剂熏蒸方法相比，更加安全；与传统酒精处理、紫外线照射方法相比更有效！

2）广谱抗菌

不仅能祛除支原体，而且能有效祛除葡萄球菌、肠球菌、大肠杆菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、牛腹泻病毒、腺病毒、多瘤病毒、诺如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

3）无腐蚀性和致癌性

乙醇作为溶剂，无腐蚀性和致癌性成分。

4）操作简便

即用型消毒液，可以快速简单地保持工作区的清洁干净。

使用方法及步骤：

 

喷雾剂:

注：对于细胞培养箱，内部喷洒支原体祛除喷雾或用湿巾擦拭后，应打开箱门通风至少1小时。如培养箱带热灭活功能，可开启该功能以替代风干。

 

湿巾:

对于移液器，门把手，电子设备等，可使用支原体祛除湿巾。擦拭后，应让其被消毒物体的表面保持湿润，再让其自然风干。

培养箱水槽和水浴锅中预防支原体污染的方法

细胞培养环境中，培养箱水槽、水浴锅经常会有支原体以及各种细菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及时，水槽中的水源即会成为细胞污染的重要来源。

保持水槽的洁净，对细胞培养的顺利进行非常重要。

众多实验室日常都在使用德国MB公司生产的Water Shield支原体污染防护剂（水槽用）。Water Shield可持续作用四周，使水源避免受到支原体、细菌、酵母、霉菌和孢子的污染。

 

产品特点：

1）长效。Water Shield含表面活性剂、季铵盐和络合剂，不易挥发，可持续作用4周。

2）安全。不含醛类或叠氮化物，对细胞无毒害。

3）广谱。预防支原体、细菌、酵母菌、霉菌和孢子污染。

4）方便。Water Shield按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

5）不产生水垢。

操作步骤：

1）Water Shield和蒸馏水可直接加入培养箱水槽或水浴锅中。

2）Water Shield按1:200比例使用，例如：1000ml蒸馏水+5ml Water Shield，或10L蒸馏水+50ml Water Shield。

3）4周左右清洗水槽，换水，重新加入Water Shield。

 

注意事项：

避免吸入。眼睛接触或长时间皮肤接触可能会产生刺激性。因而，使用试剂时应戴上护目镜和一次性手套。一旦皮肤接触，应用大量水冲洗。

Water Shield对玻璃、陶瓷、塑料、橡胶、钢制品、贵金属和其他金属安全性良好。