细胞培养的无菌环境有哪些？

一、无菌室

无菌室的结构：一般由更衣间、缓冲间、操作间三部分组成。

无菌室的消毒和防污染：为保持无菌状态，经常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2小时），每周甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）和每月新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。实际工作中，要根据无菌室建筑材料的差异来选择合适的消毒方法。

此外，还应注意防止无菌室的污染。造成无菌室污染的可能包括：送入无菌室的风没有被过滤除菌；进出无菌室时，能使外界空气直接对流进无菌室的操作间；等。

二、超净工作台

工作原理：鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。根据气流在超净工作台的流动方向不同，可将超净工作台分为侧流式、直流式和外流式三种类型。

超净台的使用与保养：超净台的平均风速保持在0.32-0.48米/秒为宜，过大、过小均不利于保持净化度；使用前最好开启超净台内紫外灯照射10－30分钟，然后让超净台预工作10－15分钟，以除去臭氧和使用工作台面空间呈净化状态；使用完毕后，要用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净，以保证超净台无菌。还要定期用福尔马林熏蒸超净台。

这里的工作区域包括实验台、超净台、培养箱（水槽除外）、液氮罐、移液器、门把手等细胞培养的环境。

使用德国MB公司生产的支原体祛除喷雾或湿巾（品名：Mycoplasma-off™），可在5-10分钟清除支原体，高效快速，操作方便。

产品特点及原理：

1）快速有效

喷雾剂和湿巾中含有支原体专用杀除剂Mynox®，可在几分钟内迅速杀除支原体。

与传统的化学试剂熏蒸方法相比，更加安全；与传统酒精处理、紫外线照射方法相比更有效！

2）广谱抗菌

不仅能祛除支原体，而且能有效祛除葡萄球菌、肠球菌、大肠杆菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、牛腹泻病毒、腺病毒、多瘤病毒、诺如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

3）无腐蚀性和致癌性

乙醇作为溶剂，无腐蚀性和致癌性成分。

4）操作简便

即用型消毒液，可以快速简单地保持工作区的清洁干净。

使用方法及步骤：

 

喷雾剂:

注：对于细胞培养箱，内部喷洒支原体祛除喷雾或用湿巾擦拭后，应打开箱门通风至少1小时。如培养箱带热灭活功能，可开启该功能以替代风干。

 

湿巾:

对于移液器，门把手，电子设备等，可使用支原体祛除湿巾。擦拭后，应让其被消毒物体的表面保持湿润，再让其自然风干。

培养箱水槽和水浴锅中预防支原体污染的方法

细胞培养环境中，培养箱水槽、水浴锅经常会有支原体以及各种细菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及时，水槽中的水源即会成为细胞污染的重要来源。

保持水槽的洁净，对细胞培养的顺利进行非常重要。

推荐众多实验室日常都在使用德国MB公司生产的Water Shield支原体污染防护剂（水槽用）。Water Shield可持续作用四周，使水源避免受到支原体、细菌、酵母、霉菌和孢子的污染。

 

产品特点：

1）长效。Water Shield含表面活性剂、季铵盐和络合剂，不易挥发，可持续作用4周。

2）安全。不含醛类或叠氮化物，对细胞无毒害。

3）广谱。预防支原体、细菌、酵母菌、霉菌和孢子污染。

4）方便。Water Shield按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

5）不产生水垢。

操作步骤：

1）Water Shield和蒸馏水可直接加入培养箱水槽或水浴锅中。

2）Water Shield按1:200比例使用，例如：1000ml蒸馏水+5ml Water Shield，或10L蒸馏水+50ml Water Shield。

3）4周左右清洗水槽，换水，重新加入Water Shield。

 

注意事项：

避免吸入。眼睛接触或长时间皮肤接触可能会产生刺激性。因而，使用试剂时应戴上护目镜和一次性手套。一旦皮肤接触，应用大量水冲洗。

Water Shield对玻璃、陶瓷、塑料、橡胶、钢制品、贵金属和其他金属安全性良好。