定义:细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。
分类:
按转染途径可分为:细胞转染分为物理介导、化学介导和生物介导三类。
按转染结果可分为:瞬时转染和稳定转染
应用:在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中。
总结:转染,是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。
不同转染途径的比较
1.物理介导:电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例。
2.化学介导:方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术。
3.生物介导:方法有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
理论上,理想的细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术,目前看来,虽然转染效率高、细胞毒性低,但整个过程比较复杂复杂,常常对细胞类型有很强的选择性。
因此,无论采用哪种转染技术,想要获得*优的转染结果,都需要对转染条件进行一定的优化。
影响转染效率的因素很多,从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态,到转染方法的操作细节,都需要考虑。
三种转染方法的优劣都给大家准备好了,有需要的同学可以截图保存。
2
不同转染结果的比较
瞬时转染(transient transfection)
外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其他调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24~72h小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统和荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。
稳定转染(Stable transfected)
外源DNA既可以整合到宿主细胞中,也可能作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记。如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。
血清在细胞培养过程中的重要性不言而喻:
提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调节它们所结合的物质活力。
有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
起酸碱度缓冲液作用。
提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
参与细胞冻存。
......
一款优质的血清,能成为细胞实验的“*辅助”。
Ausbian进口特级胎牛血清与市面上其他品牌血清相比,有*优势:
1. 精选内毒素更低批次(≤3EU/ml),进口。是细胞典藏等重大项目十几年的稳定供应品牌。
2. 新批次在试用前,提供试用服务,养细胞更放心。
3. 每个批次产量800-2000升,试用满意的实验室批号优先锁定,保证大多数项目两年不需换批次,细胞试验数据稳定。
4. 每年按厂家生产顺序,会有多批次平行供应,每个实验室专属批号管理,保证供货稳定。
5. 为Ausbian血清用户免费提供申报支持,具有完整的检测报告,为各类项目的申报提供支持。(同时为血清VIP用户在支原体检测、方法学验证等方面,提供更多免费延伸性技术帮助)。
6. 针对特殊科研项目,可提供3-5个平行批次,让试验人有更多选择空间。
7. 为Ausbian血清提供免费代储存服务,为储存空间不足的实验室提供可靠的血清仓储保护,按要求随时发货。
8. Ausbian血清从出厂,到实验室,全程低温冷链保护,确保血清无反复冻融。
9. 免费真品保障,每个血清瓶身加贴Viansaga®易破损防伪标签,Ausbian品牌真品保护,逢假必究,为实验室做好售后保障。
10. 免费无忧售后,所有实验室签收的Ausbian胎牛血清,从签收日开始计算,一年之内,血清在妥善保管、未开封未融化、且不影响二次销售的情况下,均可享受无条件退货或换货的售后保障。
11. 免费专业帮助,汇集近二十年,千万个血清用户细胞培养经验,为各种细胞培养提供问题梳理分析,解决方案参考。
12. Ausbian品牌拥有全系列血清产品线:
特级胎牛血清、细胞治疗专用胎牛血清(货号:WS500T(红点)),透析胎牛血清 (货号:VS500TZ )等多系列产品,服务更专业更精准。