使用前处理:大部分血清在使用前必须灭活处理,即56℃30分钟。灭活的目的是去除血清中的补体成分,避免补体对细胞产生毒性作用。血清经过灭活也会损失一些对细胞有利的成分,如生长因子,因此也有人提出血清不经灭活直接用于培养,这样做的前提是确认血清中不含补体成分。对于一些品质高的胎牛血清和新牛血清可以考虑不经灭活直接用于细胞培养。
储存条件:血清一般储存于-20℃,同时应避免反复冻融。购买大包装的血清后,首先要灭活处理,然后分装成小包装,储存于-20℃,使用前融化。融化时最好现置于4℃。融化后的血清在4℃不宜长时间存放,应尽快使用。
使用浓度:自从有了合成培养基,血清就是作为一种添加成分与合成培养基混合使用,使用浓度一般为5-20%,常用是10%。过多血清容易使培养中的细胞发生变化,特别是一些二倍体的无限细胞系,迅速生长之后容易发生恶性转化。 采购血清时,最好先从供应商处索取样品进行试验,选定一批后就要保留足够使用6个月至1年的量,直至用另一批经过预先试验的样品代替。
与4℃过夜法相比,三步法为什么对血清更好呢?重点有二!
其一:关系到沉淀出现的几率!
记得吗?血清在融化过程中,瓶子里冰块的底部你会看见亮亮的蛋白丝在下沉,如同蜂蜜溶于水时的亮线,这就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔点高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下高级冰淇淋和大棒冰的区别,你懂得!)试想,如果采用4℃过夜的方法,1瓶500毫升的血清融化好,大约需要10小时左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此时就很容易有一些蛋白饱和析出,(大多是脂蛋白和纤连蛋白),这就是血清融化中产生沉淀的重要原因之一。
采用三步法,只要2.5个小时,温和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化过程中可以间断轻轻摇摆瓶子,让蛋白在瓶中混匀。此方法不但节约了时间,而且最大限度减少了血清沉淀出现的几率。
血清融化过程中,蛋白质会比水先融化。冰块底部亮亮的细丝就是融化中的蛋白
其二:血清在培养细胞中,最重要的是利用它的活性的因子,因此,融化过程中最大限度地保留因子的活性,就变得非常重要。回忆一下,细胞复苏时,要保持细胞的活性,我们是要遵循“快融"原则还是“慢融"原则呢?快融!血清同样如此!三步法需要两个半小时,4℃过夜需要大约10个小时(冰箱一般设2-8℃,所以各实验室融化时间会稍有出入)。哪个速度对保留活性更好?不言而喻!
下面,我们详细解读『血清的三步融化法』的步骤:
图:刚从-28℃拿出的血清,是这个样子的
融化血清第一步
温度:室温
时间:100ml - 35分钟
500ml - 90分钟
1000ml - 100分钟
或
温度:15-20℃水浴(新接的自来水24℃上下)
时间:100ml - 5分钟
500ml - 18分钟
1000ml - 20分钟
图:这是最近Ausbian血清的大区经理周博,在天津血研所实验室拍到的——实验人员三步法化血清的图片,为了节约时间,实验人员采取的是第一步20℃水浴18min的方法。(用现接的自来水放入冰冻的血清,即可达到20℃水浴的效果。一般实验室没有能制冷到20℃的水浴锅)
融化血清第二步
温度:20℃水浴(新接的自来水24℃上下)
时间:100ml - 15分钟
500ml - 25分钟
1000ml - 30分钟
图:第二步,仍旧是新接的自来水浴,25min
融化血清第三步
温度:37℃水浴
时间:100ml - 20分钟
500ml - 35分钟
1000ml - 45分钟
第三步,将血清置于37℃水浴锅中进行融化,大约30nmin左右,血清就*融化,可以分装了。
图:大家看,使用三步法融化的血清十分清亮,养细胞的效果也是棒棒哒。
注意
1.在水浴过程中,血清的平面要*浸在水中。在融化过程中要慢慢摇动,使血清混匀,但不要产生泡沫!
2.胎牛血清不推荐热灭活。
3.此三步法适用于所有品牌、所有级别的进口或国产血清,均可让血清在减少沉淀、保留活性、提高细胞培养效果方面,得到不同程度的提高!
看到这里,你是不是迫不及待的想试试融化血清的三步法了呢?其实,想快速得到高品质的血清,除了科学的融化方法,自身品质出众的血清,完备的运输冷链,贴心的售后服务,这些都是*的!
Ausbian®特级胎牛血清所有血清出厂前,均经过严格质控,每个批次附有详细完整的《检测报告》,包括:品名,货号,批号,血源地,生产日期,保质期,pH值、渗透压、血红蛋白、总蛋白、球蛋白、IgG、内毒素、无菌检查(细菌、真菌、支原体)、病毒检查(如BVD、牛腺病毒、细胞病变效应等)、促细胞生长能力、细胞毒性、BVD-1/2抗体检查等。
实验人对于新批次血清,应认真审阅《检测报告》,做好试用前筛选第一步。(如何看懂《检测报告》,可登陆“缔一生物"网站,留言技术部,得到免费帮助。)
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