细胞培养的无菌环境-无菌室和超净工作台

一、无菌室

无菌室的结构：一般由更衣间、缓冲间、操作间三部分组成。

无菌室的消毒和防污染：为保持无菌状态，经常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2小时），每周甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）和每月新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。实际工作中，要根据无菌室建筑材料的差异来选择合适的消毒方法。

此外，还应注意防止无菌室的污染。造成无菌室污染的可能包括：送入无菌室的风没有被过滤除菌；进出无菌室时，能使外界空气直接对流进无菌室的操作间；等。

二、超净工作台

工作原理：鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。根据气流在超净工作台的流动方向不同，可将超净工作台分为侧流式、直流式和外流式三种类型。

超净台的使用与保养：超净台的平均风速保持在0.32-0.48米/秒为宜，过大、过小均不利于保持净化度；使用前最好开启超净台内紫外灯照射10－30分钟，然后让超净台预工作10－15分钟，以除去臭氧和使用工作台面空间呈净化状态；使用完毕后，要用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净，以保证超净台无菌。还要定期用福尔马林熏蒸超净台。

细胞间发生支原体污染的风险较高，因为人、试剂、细胞株都可携带支原体。下面，笔者从预防的角度，对降低支原体污染风险提供一些建议，供参考。

1. 预防人源携带的支原体

1）应带帽子、口罩、手套、白大褂，应预防个人携带的支原体飘散到空气中，同时应注意个人卫生。

2）在超净台上操作，必要时打开酒精灯。

3）操作时尽量不说话。

2. 预防环境中的支原体

可使用德国MB公司的支原体祛除喷雾Mycoplasma Off™或湿巾Mycoplasma Off™ Wipe。该祛除剂中含有杀灭支原体的Mynox®成分。也能消除细菌、真菌和一些病毒。应定期对环境进行清洁消毒。

还可用支原体祛除喷雾对移液器进行消毒。

3. 避免物品或试剂带来的支原体污染

吸量管等实验室耗材如果为反复使用，应保证充分高压灭菌。

应对培养基、细胞等定期进行检测支原体，防止它们成为支原体的污染源。

4. 细胞培养箱、水浴锅等进行支原体的污染和祛除

可使用德国MB公司的支原体祛除剂（水槽用）Water Shield（TM）

如果注意以上因素并采取一定的预防措施，相信一定能使细胞被支原体污染的风险降至很低，祝您顺利！