支原体DNA抽提Kit特点及操作步骤

在细胞培养过程中，病原污染可以算得上是科研工作者的噩梦了。其中支原体污染更像是一个无形的杀手，时刻威胁着细胞的安全。

细菌真菌污染还有迹可循，起码显微镜下能够清晰地看到，但是支原体个子小，不易观察，由于繁殖速度比较慢，前期感染几乎没有症状。经常稍不留意，就中了支原体的「阴招」。统计显示，全球大约有60%左右的细胞培养存在或曾经存在过支原体污染。

那到底如何判断细胞究竟有没有感染支原体？今天我们就来从原理上深扒一下，网传的肉眼判断是否感染支原体大法到底正不正确！

支原体感染症状1：细胞生长缓慢甚至死亡？

被广泛使用的细胞培养基，不仅给细胞提供支持和养分，对于支原体而言，也是天堂一般的存在。

适宜的温度（37℃）

合适的PH（7-8之间都可生存）

充足的养分（各种氨基酸、生长因子等）

一定的二氧化碳（5%左右）

与细胞培养高度重合的培养条件，注定了支原体要与细胞共同竞争有限的生存资源。

早有研究表明[1]，一些支原体（包括最为常见的人型支原体、发酵支原体、精氨酸支原体等），通过精氨酸脱亚胺酶分解精氨酸来供能。当这些支原体混入细胞培养体系后，会与细胞争抢精氨酸，导致细胞「吃不饱饭」，出现营养不良的症状：生长速率异常、活力下降、易脱壁等等。

如果你培养的细胞出现以下情况，基本可以确定是支原体感染了，不放心的话可以再配合支原体检测试剂（检测神器帮你揪出培养基中的支原体！）进一步确认。

细胞被支原体污染后的表现

①细胞生长缓慢

②细胞变形

③培养基中碎片增加

④细胞易聚团

⑤镜下观察有小黑点

⑥培养基提前变色

除了影响细胞活力，支原体还会给细胞带来的几百种基因表达的改变,包括编码受体、离子通道、生长因子的基因和癌基因等方面[4]。它包含高度富含免疫原性的脂蛋白，可以锚定在胞膜的外表面，被TLR2等免疫细胞的受体识别。激活NF-kB途径，进一步导致细胞活化[5]，偏离最终的实验结果。

支原体DNA抽提Kit特点及操作步骤

特点

1.符合欧洲药典的要求。

2.从细胞上清和生物制品中，均可分离支原体DNA，全程只需30分钟。

3.洗脱DNA纯度高，体积50μl，保证PCR最大的灵敏。

操作步骤

试剂盒组分

Spin columns（核酸纯化住）、Collection tubes（收集管）、Conditioner液、Binding Buffer E液、Buffer A1液、Buffer A2液、Buffer E液

储存条件

室温